WB實(shí)驗(yàn)時(shí)，有哪些方法可以快速判斷轉(zhuǎn)膜是否成功？

我們都知道，在Western Blot（WB）實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)膜是將電泳分離后的蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上的關(guān)鍵步驟。如果轉(zhuǎn)膜不成功，后續(xù)的抗體孵育和檢測(cè)就都會(huì)受到影響，最終導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確或者沒(méi)有信號(hào)，所以，快速判斷轉(zhuǎn)膜是否成功非常重要。

那問(wèn)題來(lái)了！在Western Blot（WB）實(shí)驗(yàn)中，我們?nèi)绾斡行�判斷轉(zhuǎn)膜是否成功呢？

實(shí)驗(yàn)外包公司長(zhǎng)沙慧登生物實(shí)驗(yàn)室建議，可以采取以下幾種方法：

1、使用預(yù)染Marker：轉(zhuǎn)膜后，可以通過(guò)觀察預(yù)染Marker在凝膠和膜上的分布來(lái)初步判斷轉(zhuǎn)膜效率，如果凝膠上的Marker幾乎消失，而膜上有清晰的Marker條帶，則表明轉(zhuǎn)膜較為成功。這是比較直接的方法，因?yàn)轭A(yù)染Marker的顏色肉眼可見，不需要復(fù)雜步驟，實(shí)驗(yàn)外包公司長(zhǎng)沙慧登生物實(shí)驗(yàn)室也更為推薦這個(gè)。

2、麗春紅染色：麗春紅染色是一種快速的可逆的染色方法，可以暫時(shí)顯示膜上的總蛋白。染色后的膜可以繼續(xù)進(jìn)行蛋白印記分析，因?yàn)辂惔杭t不會(huì)固定蛋白質(zhì)。操作方法也不難，只需要將膜浸泡在麗春紅染液中，然后洗脫，可以看到紅色條帶，如果有條帶說(shuō)明蛋白質(zhì)已經(jīng)轉(zhuǎn)移到膜上。但實(shí)驗(yàn)外包公司長(zhǎng)沙慧登生物實(shí)驗(yàn)室需要提醒大家的是，麗春紅染色可能靈敏度不高，特別是對(duì)于低豐度蛋白可能不明顯，不過(guò)作為快速檢測(cè)還是可行的。

3、考馬斯亮藍(lán)染色：這種方法可以用來(lái)染色電轉(zhuǎn)移后的凝膠，操作就是轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，將凝膠用考馬斯亮藍(lán)染色，觀察是否還有蛋白質(zhì)殘留。如果凝膠中大部分條帶消失或明顯變淡，說(shuō)明蛋白質(zhì)已經(jīng)轉(zhuǎn)移到膜上。但這種方法需要染色和脫色步驟，可能需要較長(zhǎng)時(shí)間，實(shí)驗(yàn)外包公司長(zhǎng)沙慧登生物實(shí)驗(yàn)室覺得可以在轉(zhuǎn)膜后立即處理凝膠，作為后續(xù)確認(rèn)。而且，雖然考馬斯亮藍(lán)染色雖然理論上是可逆的，但由于考馬斯亮藍(lán)染色中使用的醇和酸可能會(huì)在使用后將蛋白質(zhì)樣品固定在凝膠中，因此實(shí)驗(yàn)外包公司長(zhǎng)沙慧登生物實(shí)驗(yàn)室提醒大家，染色后不宜進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。

好了，在Western Blot（WB）實(shí)驗(yàn)中，有效判斷轉(zhuǎn)膜是否成功的方法就重點(diǎn)說(shuō)這3個(gè)了，如果大家對(duì)Western Blot（WB）實(shí)驗(yàn)還有不明白的或者是需要Western Blot（WB）實(shí)驗(yàn)協(xié)助指導(dǎo)的，可以找實(shí)驗(yàn)外包公司長(zhǎng)沙慧登生物實(shí)驗(yàn)室客服老師免費(fèi)咨詢哦~