流式細胞分選實驗，怎么做才是正確的！

如果你需要對細胞進行細致觀察和分析的話，流式細胞分選實驗那就要上場了！

因為流式進行細胞分選的話，它可以允許研究人員根據(jù)細胞的特定特性，如大小、形態(tài)、表面標記或內(nèi)部分子表達，快速分離出目標細胞群體，可以很有效的幫助科研人員進行研究。

那問題來了，這流式細胞分選實驗的原理是什么呢？ 

當熒光染色或標記的單細胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動室內(nèi)。

流動室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的包裹和推動下，細胞被排成單列，以一定速度從流動室噴口噴出。

在流動室的噴口上配有一個超高頻的壓電晶體，充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測細胞就分散在這些液滴之中。

將這些液滴充以正、負不同的電荷，當液滴流經(jīng)過帶有幾千伏的偏轉板時，在高壓電場的作用下偏轉，落入各自的收集容器中，沒有充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現(xiàn)細胞的分離。

弄清楚流式細胞分選實驗原理了，接下來就看看流式細胞分選實驗具體操作步驟吧！

收集和清洗細胞，制備成單細胞懸液（以外周血為例）：

1、收集一管抗凝外周血，置于15mL離心管中，并加入等量PBS溶液稀釋，用吸管充分吹打混勻；

2、于另一個15mL離心管中加入等體積PBMC分離液；

3、將6mL稀釋后的全血樣品緩慢加入PBMC分離液上層，注意：傾斜45度緩慢加入，不可用力過大，避免將全血樣品混入PBMC分離液中；

4、置入離心機中，配平，800離心30min；

5、離心后，緩慢取出離心管，于超凈臺內(nèi)用吸管微吸出與白膜層靠近的少部分上清液；

6、繼續(xù)用1mL移液槍將白膜層吸出，轉移至另一新的15mL離心管中，加入10mLPBS溶液稀釋，用吸管充分吹打混勻(目的:盡可能稀釋、去除可能混有的PBMC分離液和血漿;

7、置入離心機中，500g 離心5min;

8、棄上清，再加入10mLPBS，吹打混勻，500g 離心5min，留取細胞沉淀，即PBMC；

9、PBMC用PBS溶液重懸。

根據(jù)需要進行細胞標記：使用特異性熒光染料或抗體標記目標細胞。注意抗體要達到飽和溶度，避光孵育30min后，加入1mLPBS，500g 離心5min，用于后續(xù)儀器分析。

流式細胞分選實驗的設備設置：

1、打開流式分選儀，預熱并進行設備自檢。

2、設置實驗參數(shù)，包括液流壓力、激光和光電倍增管的配置。

3、熒光補償調(diào)整：由于不同熒光標記的光譜重疊，需要進行補償調(diào)整，確保信號的準確性。

4、樣本上機：根據(jù)細胞特性設置閾值，如前向散射（FSC）和側向散射（SSC）來排除細胞團塊和碎片。

好了，關于流式細胞分選的實驗操作步驟就說到這了，如果大家對其他實驗還有不明白的，或者是需要實驗協(xié)助指導的，可以直接咨詢靠譜的長沙細胞實驗外包公司慧登生物實驗室客服，24小時在線免費咨詢。